有色溶液對光線有選擇性的吸收作用，不同物質(zhì)由于其分子結構不同，對不同波長線的吸收能力也不同，因此，每種物質(zhì)都具有其特異的吸收光譜。有些無色溶液，光雖對可見光無吸收作光光度技術吸收用，但所含物質(zhì)可以吸收特定波長的紫外線或紅外線。
一、光的基本知識
光是由光量子組成的，具有二重性，即不連續(xù)的微粒和連續(xù)的波動性。波長和頻率是光的波動性和特征，可用下式表示：
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λ＝───
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式中λ為波長，具有相同的振動相位的相鄰兩點間的距離叫波長。Ｖ為頻率，即每秒鐘振動次數(shù)。Ｃ為光速等于299770千米／秒。光屬于電磁波。自然界中存在各種不同波長的電磁波，列成表1-1所示的波譜圖。
分光光度法所使用的光譜范圍在200nm-10μ（1μ= 1, 000nm
）之間。其中200nm－400nm為紫外光區(qū)，400nm－760nm為可見光區(qū)，760nm－10,000nm為紅外光區(qū)。
二、朗伯－比爾（Lambert-Beer）定律
朗伯－比爾定律是比色分析的基本原理，這個定律是有色溶液對單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。
1.朗伯定律
一束單色光通過溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的強度就要減弱：若溶液濃度不變，則溶液的厚度愈大（即光在溶液中所經(jīng)過的途徑愈長），光的強度減低也愈顯著。
2.朗伯－比爾定律
如果同時考慮吸收層的厚度和溶液濃度對光吸收的影響，則必然將朗伯定律和比爾定律合并起來，吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比，這就是朗伯－比爾定律。
三、測定溶液中物質(zhì)的含量
光度法都可用于測定溶液中物質(zhì)的含量。測定標準溶液（濃度已知的溶液）和未知液（濃度待測定的溶液）的吸光度，進行比較，測出不同濃度的標準液的吸光度，繪制標準曲線，在選定的濃度范圍內(nèi)標準曲線應該是一條直線，然后測定出未知液的吸光度，即可從標準曲線上查到其相對應的濃度。
